本遊戲是以 N64 的經典 3D 動作遊戲《超級瑪利歐 64（Super Mario 64）》為基礎所製作，不同於 N64 版中玩家僅能操作瑪利歐，本次的 NDS 版中將有瑪利歐、路易奇、壞俐歐與耀西等四名角色可供玩家選擇，每位角色都有各自的特殊能力，瑪利歐可以使用拳打、腳踢以及牆壁跳躍，路易奇可以跳得非常高，壞俐歐可以打破某些障礙物，耀西可以把敵人吞下肚變成蛋拿來丟擲。
而在吃下威力花（Power Flower）之後，還會激發每個角色的潛在能力，而可以施展出隱形、噴火、空中漂浮...等特殊技能。玩家將必須善用這些能力，找回散落於世界各地的威力星（Power Star）。
NDS 版除了可選擇角色增多之外，遊戲的內容也大幅的增加，新增了許多關卡，威力星的數目也增加到 150 顆，比起 N64 版多出了 30 顆。遊戲並利用 NDS 的無線網路功能來提供各種多人遊玩模式，包括多人遊玩的冒險模式，以及各式各樣利用觸控螢幕遊玩的小遊戲，而且多人模式只需要一個遊戲卡匣就可以透過無線網路分享的方式提供多人一同遊玩。
《超級瑪利歐 64 DS》預定 11 月 21 日於美國，12 月 2 日於日本隨 NDS 主機一同上市，定價 29.99 美元 / 4800 日圓（含稅），誕生至今超過 20 年的瑪利歐，又將再次於最新掌機上帶給玩家歡樂，有興趣的玩家不妨密切注意相關消息的報導以及 NDS 主機於台灣地區的上市消息。
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