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《刺客教條︰兄弟會》將會同伴的刺客們協力，將企圖支配義大利的波爾吉亞（ボルジア）家族打倒，為羅馬帶來自由。主角們的敵人：塞薩爾波爾吉亞（Cesare Borgia）為教皇亞歷山大六世（Alexander VI）之子，聖殿騎士團的騎士團長。在劇情影片裡可以看到主角和塞薩爾的對決場景，背景在西班牙，可以預見本作的戰鬥將會延伸到羅馬之外。
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《刺客教條︰兄弟會》為系列首款支援多人連線遊玩。PS3 版於 11 月 18 日，XBOX360 版於 11 月 16 日發售。
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